簡(jiǎn)述微流控芯片技術(shù)在生物分析中的應(yīng)用
自從瑞士的Manz和Widmer于20世紀(jì)90年代初首次提出微型全分析系統(tǒng)的概念以來(lái),經(jīng)歷了發(fā)展初期的冷落與彷徨,在短短的10余年中已發(fā)展為當(dāng)前世界上最前沿的科技領(lǐng)域之一。微流控芯片是微型全分析系統(tǒng)中最活躍的領(lǐng)域和發(fā)展前沿,在某種程度上,微型全分析系統(tǒng)和微流控芯片實(shí)質(zhì)為同一概念。
微流控芯片在微型化、集成化和便攜化方面的巨大潛力,為其在生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)和衛(wèi)生防疫等眾多領(lǐng)域的應(yīng)用提供了廣闊的應(yīng)用前景。
一、核酵分析
(1)、核酸的擴(kuò)增、分離及測(cè)序是微流控芯片的主要應(yīng)用領(lǐng)域。
(2)、研究人員提出了連續(xù)流動(dòng)式微流控PCR擴(kuò)增芯片,反應(yīng)溶液循環(huán)流經(jīng)不同的溫區(qū)完成PCR擴(kuò)增反應(yīng),整個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)全部在流動(dòng)中完成,展示了微全分析系統(tǒng)在試樣處理方面的潛力。
(3)、在刻有32個(gè)通道的玻璃芯片上,四色測(cè)序800bp,僅用時(shí)78min。Medintz等,用96通道圓盤(pán)式陣列芯片毛細(xì)管電泳進(jìn)行DNA測(cè)序,500bp分離測(cè)序時(shí)間小于30min,總錯(cuò)檢率小于1%。人們還利用微流控芯片技術(shù)開(kāi)展了基因表達(dá)、基因突變性、基因功能和單核苷酸基因多態(tài)性等的研究,取得了豐碩成果。
二、肽和蛋白質(zhì)分析
(1)、目前蛋白組分析主要是將蛋白質(zhì)大分子降解為肽,再通過(guò)分析肽譜以及進(jìn)行肽鏈的測(cè)序加以實(shí)現(xiàn)。
(2)、利用等電聚焦毛細(xì)管電泳芯片技術(shù),以Cy5標(biāo)記肽,對(duì)細(xì)胞色素c、核糖核酸酶A和肌紅蛋白等9種蛋白質(zhì)混合物進(jìn)行分離檢測(cè),5min即完成了整個(gè)分析過(guò)程。
(3)、研究了微流控芯片蛋白質(zhì)二維電泳分離測(cè)定,以激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器檢測(cè),13min內(nèi)可對(duì)酪蛋白的胰蛋白酶降解產(chǎn)物進(jìn)行分離檢測(cè)。
三、氨基酸分析
(1)、微流控芯片技術(shù)在氨基酸分析中的應(yīng)用較為廣泛
(2)、設(shè)計(jì)了一種循環(huán)柱切換的微流控芯片,微通道表面用線(xiàn)聚丙烯酰胺衍生化,以nTc標(biāo)記氨基酸,取得了良好的分離測(cè)定效果。
(3)、在硼硅玻璃電泳芯片上,以一環(huán)糊精作手性添加劑,對(duì)氨基酸樣品進(jìn)行了手性拆分分析。
(4)、對(duì)進(jìn)樣儲(chǔ)液池加以改進(jìn),制成連續(xù)換樣流通式儲(chǔ)液進(jìn)行裝置,實(shí)現(xiàn)了微流控芯片對(duì)氨基酸的高通量分析。
四、細(xì)胞分析
(1)、微控芯片通道寬度一般為10~50μm,和生物細(xì)胞大小相當(dāng),生物細(xì)胞在微通道內(nèi)非常容易操縱、觀(guān)察和檢測(cè),因此,以微流控芯片進(jìn)行單細(xì)胞研究具有獨(dú)特的優(yōu)越性。
(2)、在玻璃芯片通道中,用介電泳力和重力場(chǎng)流分級(jí)分離細(xì)胞,垂直方向受到向下重力和向上介電泳力的作用而得到分離。
(3)、以化學(xué)消解法在線(xiàn)消解大腸桿菌細(xì)胞膜,胞內(nèi)成分半乳糖苷酶釋放出來(lái),以熒光法檢測(cè)之。
(4)、通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)對(duì)單個(gè)胰島釋放出的胰島素進(jìn)行了免疫分析。
五、藥物分析與篩選
(1)、藥物的分析與篩選是微流控芯片另一個(gè)可發(fā)揮重要作用的領(lǐng)域。
(2)、利用免疫法測(cè)定了血清中治療哮喘藥物茶堿,他們將含有未標(biāo)記的藥物和已知數(shù)量的熒光標(biāo)記的藥物及藥物抗體混合,分離檢測(cè)藥物及藥物與抗體的復(fù)合物,分離分析時(shí)間僅40s。
(3)、利用微流控芯片技術(shù)微型、集成化的特點(diǎn),把一些反應(yīng)器及通道微型化、陣列化,同時(shí)實(shí)現(xiàn)了樣品前處理和分離,研制了一種動(dòng)態(tài)的高通量藥物篩選平臺(tái),在很短的時(shí)間內(nèi)完成成千上萬(wàn)個(gè)藥物和生物靶標(biāo)的作用鑒定,建立了一種基于分子水平的更適于藥物篩選的技術(shù)體系。
六、免疫分析
(1)、免疫分析是一種判斷和測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)存在與否及濃度大小的特異性方法,因其具有高度的選擇性,該法已成為目前臨床診斷、生物醫(yī)學(xué)等的重要工具。
(2)、采用微流控芯片法進(jìn)行免疫分析,他們?cè)谖⑼ǖ乐屑晌⒚庖叻磻?yīng)器,免疫產(chǎn)物以電泳分離、熒光檢測(cè),分別測(cè)定了卵白蛋白及抗雌二醇的含量。
(3)、在微通道中構(gòu)筑了一道圍堰,用來(lái)?yè)踝〗Y(jié)合抗體的聚苯乙烯微珠,血清中癌胚抗原和抗體結(jié)合,再以標(biāo)記了膠狀金的免疫球蛋白結(jié)合,熱透鏡檢測(cè),和ELISA法對(duì)比,分析時(shí)間從45h減少到35min。
七、酶分析
(1)、分析具有特異性高、反應(yīng)條件溫和及反應(yīng)速度快等優(yōu)點(diǎn),也是目前臨床診斷和生物醫(yī)學(xué)等的重要工具。
(2)、在多分支的微流控芯片上,用乙酰膽堿酯酶測(cè)定乙酰膽堿酯酶抑制劑的含量。乙酰膽堿酯酶催化乙酰膽堿水解生成膽堿,膽堿與熒光衍生劑結(jié)合產(chǎn)生熒光,激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器檢測(cè)。分析時(shí)間為70s。
(3)、在微流控芯片上刻蝕了容積為6.5m的反應(yīng)器,填人固化乳酸氧化酶的多孔玻珠,形成酶反應(yīng)器,測(cè)定了血清樣品中的乳酸酶。微流控芯片法分析酶,將有力地推動(dòng)臨床診斷和酶的基礎(chǔ)研究。
八、單分子檢測(cè)
(1)、在玻璃微流控芯片上,利用聚焦分子流,以單分子熒光激發(fā)計(jì)數(shù)作為檢測(cè)手段,實(shí)現(xiàn)了ds-DNA片斷的單分子分離檢測(cè),為微流控芯片在單分子檢測(cè)中的應(yīng)用開(kāi)辟了先河。
(2)、單分子檢測(cè)方面的研究目前雖然較少,但可以相信,隨著微流控芯片技術(shù)的日臻完善,該領(lǐng)域?qū)?huì)受到越來(lái)越多的關(guān)注。
近幾年,微流控芯片在生物分析各個(gè)領(lǐng)域都取得了令人矚目的成果。目前微流控芯片正處于一個(gè)快速發(fā)展,逐步達(dá)到深度產(chǎn)業(yè)化的時(shí)期,有專(zhuān)家預(yù)測(cè),以微流控芯片為核心的微分析系統(tǒng)將取代當(dāng)前化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室的很多設(shè)備。