伏馬毒素（Fumonisin，F(xiàn)B）是由鐮刀菌屬在一定的溫度和濕度下產(chǎn)生的水溶性代謝產(chǎn)物，對食品污染的情況在世界范圍內(nèi)普遍存在，主要污染玉米及玉米制品。動(dòng)物試驗(yàn)和流行病學(xué)資料已表明，伏馬菌素主要損害肝腎功能，能引起馬腦白質(zhì)軟化癥和豬肺水腫等，并與我國和南非部分地區(qū)高發(fā)的食道癌有關(guān)，現(xiàn)已引起世界范圍的廣泛注意。
伏馬毒素的檢測國內(nèi)外已建立了多種方法。伏馬毒素的分析方法通常包括提取、純化、分離和檢測幾個(gè)步驟。目前，大多數(shù)方法均采用免疫親和柱（Pribolab）純化樣品，應(yīng)用HPLC或GC結(jié)合不同的檢測器進(jìn)行。

伏馬毒素（B1, B2,和B3)是由鐮孢菌(霉)屬念珠菌產(chǎn)生的真菌毒素。在世界范圍內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了伏馬毒素污染玉米的現(xiàn)象。研究表明伏馬毒素可以誘發(fā)老鼠患肝癌，豬的肺水腫和馬的腦脊髓白質(zhì)病。在一些地區(qū)中玉米中伏馬毒素含量很高，在這些地區(qū)（比如中國和非洲）人的食道癌具有高發(fā)性。

適用

PriboFast伏馬毒素試劑盒原理是競爭酶聯(lián)免疫反應(yīng)，用于檢測玉米中的伏馬毒素。

原理

這個(gè) Pribolab伏馬素素檢測試劑盒的原理是固相直接競爭酶聯(lián)免疫反應(yīng)。聚苯乙烯微孔板中包被伏馬毒素的特異性抗體，這種抗體和伏馬毒素的各個(gè)亞型都有很好的交叉反應(yīng)。利用90%的甲醇從樣品中提取伏馬毒素，把提取的樣品和HRP（辣根過氧化物酶）標(biāo)記的伏馬毒素混勻并加入對應(yīng)的孔檢測。酶標(biāo)記毒素與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的伏馬毒素競爭與包被在微孔底部的抗體結(jié)合。孵育一段時(shí)間后，倒出孔里的液體，清洗除去沒有反應(yīng)的物質(zhì)后加入顯色底物（TMB），在酶的作用下孔里將會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色。顯色顏色的深淺與結(jié)合物的量成正比例的關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中伏馬毒素的量成反比例關(guān)系。所以，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的伏馬毒素濃度越高，顯色的藍(lán)色將會(huì)越淺。加入酸，終止反應(yīng)，底物顏色由藍(lán)色變?yōu)樽攸S色。微孔板放進(jìn)酶標(biāo)儀里，在OD450nm讀取吸光度值。樣品的吸光度值與試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)OD值相比較，相對應(yīng)得出結(jié)果。

提取步驟中需要的材料

• 研磨器；
• 燒杯：125ml；
• 天平：量程為20g
• 量筒：100ml
• 甲醇：每個(gè)樣品36ml 
• 蒸餾水：每個(gè)樣品4ml
• 濾紙 ：用針孔過濾器代替；漏斗

測定步驟：

• 100μL或200μL 單道或多道移液器；計(jì)時(shí)器； 洗瓶；吸水紙；450nm 濾光片的酶標(biāo)儀
• 警告和注意事項(xiàng)
• 使用前將所有的試劑拿到室溫（19℃-27℃）。
• 試劑貯存在2℃到8℃，不要使用過期的產(chǎn)品。不要冰凍試劑盒。
• 沒有用完的試劑不要回收到原試劑瓶中。操作過程中按照要求精確量取試劑體積。
• 整個(gè)操作過程要嚴(yán)格按照要求的時(shí)間和溫度。
• 不要用口移取試劑或樣品。
• 終止液里含有酸，不要與皮膚和眼睛接觸。如果有接觸，一定要用清水清洗。
• 所有的材料、試劑和儀器可能被樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的伏馬毒素污染，在操作過程中一定要戴手套。
• 使用完畢，處理好所有的材料、試劑和儀器。

樣品提取步驟
注意：樣品必須按照有關(guān)規(guī)定收集

• 配制90%的甲醇溶液（每個(gè)樣品需要：4ml蒸餾水+36ml甲醇）
• 研磨代表性樣品（使50%的樣品可以通過一個(gè)20目的濾網(wǎng)）。
• 稱量20g研磨過濾后的樣品加入40ml 90%的甲醇溶液，樣品稀釋比為1:2(w/v)。
• 在密封的容器里混合，至少震蕩1分鐘。
• 靜置、過濾5-10ml 以上處理的液體，收集濾液。
• 以1：20的比例稀釋濾液（取0.1ml樣品提取液然后加入1.9ml的蒸餾水或無離子水）
• 樣品最終稀釋倍數(shù)為1：40，待測。

樣品測定步驟
注意：在操作時(shí)推薦使用排槍，同時(shí)每個(gè)樣品都做2個(gè)平行。

• 使用前將試劑拿到室溫。用1L水溶解PBS-Tween 袋。
• 取出混合板放于微孔支架上用于標(biāo)準(zhǔn)和樣品的測試，取相同數(shù)量的微孔（包被有抗體）置于另一個(gè)微孔支架上。
• 在每個(gè)混合板微孔中加入先加入100μl 結(jié)合物溶液A(綠色)，然后再加入100ul結(jié)合物溶液B（無色）。
• 在加有結(jié)合物的混合版的孔中加入100 μl 標(biāo)準(zhǔn)或樣品，用槍頭混合3次，
• 轉(zhuǎn)移100ul預(yù)混板微孔中的液體到對應(yīng)的包被有抗體的微孔中，室溫孵育10分鐘，最好使用多道移液器?；旌峡罩械囊后w足夠做兩個(gè)平行。
• 將孔里的液體倒入合適的容器中，用蒸餾水或無離子水洗板，然后迅速棄掉洗液到合適的容器中，重復(fù)洗3次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。
• 在吸水紙上拍打，盡可能地將水拍干。
• 每孔加入100 μl底物溶劑，室溫孵育10min。
• 每孔加入 100 μl 終止液。
• 對比標(biāo)準(zhǔn)和樣品的顏色，或在OD450 nm讀數(shù)。