微流控芯片應用于等溫擴增
高靈敏度、特異性強的核酸檢測作為分子診斷的重要手段,可以為病原體的檢測和診斷提供準確的信息,一直是傳染病檢測的金標準之一。自1985年發(fā)明以來,聚合酶鏈式反應作為核酸檢測的核心技術之一,在病原體檢測、生命科學、動物疾病防控、食品安全檢測等各個分子診斷領域發(fā)揮了極其重要的作用。但由于設備復雜性高、檢測時間長、檢測成本高、對專業(yè)實驗室依賴性強等原因,PCR檢測往往需要在中心實驗室完成,難以在基層檢測機構等各種現(xiàn)場即時檢測環(huán)境中廣泛推廣。
為了進一步提高核酸檢測水平,實現(xiàn)更方便、更快速的核酸檢測,各種等溫膨脹技術越來越受到關注,其應用范圍不斷擴大。一方面,等溫膨脹通常通過恒溫反應模式實現(xiàn)核酸膨脹,從而顯著降低了設備的復雜性;另一方面,等溫膨脹通過多種反應酶的相互作用引導核酸膨脹,忽略了PCR的反復和冷卻過程,從而顯著縮短了核酸檢測時間。因此,與PCR相比,等溫膨脹在設備簡單、檢測速度快、操作方便、成本低等方面具有一些明顯的優(yōu)勢,特別適用于現(xiàn)場即時核酸檢測。
微流控芯片作為一種新型的技術平臺,借助其內部集成的微閥、微泵、微反應器、微通道等各種功能單元組成的微流體網(wǎng)絡,可以自動完成檢測樣品的預處理、富集、反應、標記、檢測等多個反應步驟。一方面有利于實現(xiàn)樣品輸入-結果輸出的封閉式自動檢測,顯著提高檢測效率;另一方面,有利于實現(xiàn)高通量、并行性,甚至多目標多重檢測,顯著提高了整體檢測水平。核酸檢測微流控制系統(tǒng)、免疫檢測微流控制系統(tǒng)、單細胞分析微流控制系統(tǒng)等各種新型微流控制芯片檢測方法不斷涌現(xiàn)。
通過將各種檢測分析方法與微流量控制芯片相結合,有助于進一步提高其綜合檢測性能和水平。近年來,基于微流量控制芯片的新型等溫擴增檢測技術正成為核酸檢測的研究重點。借助微流量控制芯片在流體驅動和檢測過程自動化操作方面的顯著優(yōu)勢,可以進一步提高微流量控制芯片平臺上等溫擴增檢測的綜合性能,實現(xiàn)功能更強、效率更高、操作更方便、檢測靈敏度更高的核酸檢測。例如,基于離心微流量控制平臺,借助其流水線式流體驅動能力,有利于實現(xiàn)樣品進入-結果出的綜合核酸檢測。通過核酸檢測過程的全自動化,進一步縮短核酸檢測的總時間(核酸提取+核酸擴增),進一步提高等溫擴增在檢測時間上的優(yōu)勢,這對新型冠狀病毒肺炎的現(xiàn)場及時檢測具有重要意義。
基于微流控平臺,實現(xiàn)高通量或多目標、多重等溫膨脹檢測,有利于進一步提高等溫膨脹在現(xiàn)場及時檢測中的應用領域。本文首先總結了當前典型的等溫膨脹技術,并介紹了可應用于等溫膨脹的常規(guī)檢測方法。然后,針對當前等溫膨脹與微流量控制芯片相結合的特點,對幾個典型的等溫膨脹微流量控制系統(tǒng)(如功能定位、結構組成、流體控制、系統(tǒng)特征等)進行了分類、總結和特征分析。其次,描述了等溫膨脹微流量控制系統(tǒng)在不同病原體檢測領域的應用,如新冠肺炎SARS-CoV-2檢測和其他病原體檢測。最后,介紹和展望了等溫膨脹與其他新技術,如CRISPR基因編輯技術。
標簽:   微流控
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