大多數(shù)細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要37℃、5%CO₂濃度及飽和濕度的生長條件，二氧化碳培養(yǎng)箱則提供了良好的生長環(huán)境?，F(xiàn)在國內(nèi)大部分的生物實(shí)驗(yàn)室都采用熱導(dǎo)法培養(yǎng)箱，每臺(tái)培養(yǎng)箱耗資4.5萬~5.5萬元，使用壽命10年。根據(jù)中南地區(qū)及我校的報(bào)廢維修資料顯示，平均使用壽命為6.5年，主要原因是傳感器的損壞。CO2培養(yǎng)箱價(jià)格昂貴，我們希望它能按時(shí)或遲交服務(wù)，為正確使用，根據(jù)其結(jié)構(gòu)和性能要求，現(xiàn)介紹培養(yǎng)箱正確使用方法，以及常見故障的預(yù)防與處理。

一、溫度傳感器的保護(hù)

培養(yǎng)箱溫度由溫度傳感器控制，其正常工作要求室溫條件為25℃。在一般情況下，將1~2支水銀溫度計(jì)放在箱內(nèi)作為溫度對照。正確地操作溫度傳感器，使設(shè)定溫度數(shù)，箱面顯示數(shù)，箱內(nèi)溫度保持一致。在室溫超過30℃時(shí)，溫度傳感器的調(diào)節(jié)功能失效，出現(xiàn)箱體表面顯示溫度高于設(shè)定值，箱體內(nèi)部溫度又高于設(shè)定值，且常伴有警告聲。白天發(fā)生這種現(xiàn)象，降低室溫，使培養(yǎng)箱溫度恢復(fù)正常。如果在夜間發(fā)生，持續(xù)的高溫會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。為了防止這種現(xiàn)象，在夏季使用培養(yǎng)箱時(shí)，無菌室應(yīng)保持室溫約25℃。

二、氣敏保護(hù)

氣敏元件主要是控制箱內(nèi)氣壓的變化。二氧化碳傳感器的正常反饋要求：進(jìn)氣壓力為0.06兆帕。打開門后，箱內(nèi)的氣體消失，壓力降低。關(guān)閉后，CO₂傳感器在低壓刺激下有節(jié)奏地關(guān)閉，緩慢向箱內(nèi)充氣，當(dāng)進(jìn)氣壓力達(dá)到0.06兆帕?xí)r，自動(dòng)停止調(diào)節(jié)。換氣瓶時(shí)，部分實(shí)驗(yàn)人員為了提高進(jìn)氣量，用0.1帕甚至0.2兆帕壓力快速充氣，無形中破壞了CO₂傳感器。當(dāng)然這種損傷效應(yīng)無法顯示，實(shí)驗(yàn)者無法察覺，反復(fù)的錯(cuò)誤操作，CO₂傳感器損傷累積最終致命的損害，使氣壓調(diào)節(jié)失效。當(dāng)實(shí)驗(yàn)人員發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色異常，細(xì)胞生長緩慢，才發(fā)現(xiàn)已經(jīng)造成無法挽回的損傷。一個(gè)氣敏傳感器要16000元，換一個(gè)也不容易。CO₂傳感器的使用壽命與CO₂進(jìn)氣壓力的大小有關(guān)，只要對CO₂傳感器進(jìn)行適當(dāng)?shù)膲毫φ{(diào)節(jié)，就可以保護(hù)其性能。為了更好地調(diào)節(jié)壓力，本文將壓力調(diào)節(jié)歸納為4句話17個(gè)字：反時(shí)針?biāo)?/span>捍，接氣瓶，順時(shí)針減壓，壓力0.06。安民告示，貼在門上，以便于每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員都能正確安全操作。為了防止漏氣，在氣瓶出口處填上膠皮，在氣壓表接處纏上封條，氣瓶與氣壓表接合后，用肥皂水進(jìn)行氣密性測試，當(dāng)看到接口處沒有氣泡產(chǎn)生時(shí)便為合格。

三、CO₂零點(diǎn)漂移監(jiān)測：

在使用培養(yǎng)箱的過程中，CO₂壓力零點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)自然漂移，這一現(xiàn)象在箱面氣體顯示框中無法看到，實(shí)驗(yàn)人員也很難察覺到漂移結(jié)果，細(xì)胞培養(yǎng)液顏色異常，細(xì)胞生長緩慢甚至死亡。二氧化碳?xì)鈮旱牧泓c(diǎn)是否漂移，可以通過CO₂氣體檢測儀，取箱檢查氣體來確定。例如，我們測試了6個(gè)培養(yǎng)箱，其顯示值均在5%左右，測試結(jié)果是2個(gè)培養(yǎng)箱內(nèi)、外氣壓值一致，其余4個(gè)培養(yǎng)箱內(nèi)、外氣壓值最高，最高為18%，最低為0.5%，這些異常氣壓值對細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。為此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立CO₂氣壓零點(diǎn)測試系統(tǒng)，該系統(tǒng)一般每3個(gè)月測試一次，以確保CO₂氣壓實(shí)際使用值正確。

四、培養(yǎng)箱濕度監(jiān)測

二氧化碳培養(yǎng)箱在使用過程中，需要在培養(yǎng)箱托盤上放入一定量的殺菌水(3/2至全盤)，使培養(yǎng)箱處于濕度飽和的環(huán)境中，這是為了滿足開放培養(yǎng)細(xì)胞的要求。由于在飽和濕度的環(huán)境下培養(yǎng)液中的CO₂不會(huì)發(fā)生逃逸，使培養(yǎng)液的pH值趨于穩(wěn)定，有利于細(xì)胞的生長。實(shí)驗(yàn)中，由于實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)常忘記補(bǔ)水，使培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)常處于低濕甚至干燥的高溫環(huán)境中，導(dǎo)致培養(yǎng)液中的CO₂氣體易揮發(fā)，液體pH升高，影響細(xì)胞生長。為了防止此類情況的發(fā)生，我們采用了箱面大字警示與值日生責(zé)任制度相結(jié)合的辦法，使這一措施得到了很好的落實(shí)。另外，針對箱內(nèi)濕熱環(huán)境易感染細(xì)菌等問題，我們采用在1000ml水中加入2ml新潔爾滅液，對箱內(nèi)空氣進(jìn)行定期消毒，對培養(yǎng)物進(jìn)行酒精消毒，以降低箱內(nèi)微生物感染速度。在實(shí)驗(yàn)中，培養(yǎng)基分區(qū)存放，培養(yǎng)物用筐或瓷盤存放，這樣能快速存取，縮短開門時(shí)間，減少箱內(nèi)氣體和濕度的變化，節(jié)省氣體，穩(wěn)定細(xì)胞生長環(huán)境。

如前所述，二氧化碳培養(yǎng)箱在使用過程中，只要做好室溫、濕度和CO₂氣壓的零點(diǎn)試驗(yàn)及校正工作，就可以保證CO₂培養(yǎng)箱的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，使其成為培養(yǎng)細(xì)胞舒適的搖籃。