PCR 技術(shù)的基本原理
PCR — 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
優(yōu)點(diǎn):方法操作簡(jiǎn)單,反應(yīng)快速敏捷,結(jié)果可靠
原理:與細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的DNA復(fù)制過(guò)程十分相似。
是在模板、引物和4種dNTP(包含A、T、C、G四種堿基的脫氧核苷酸)存在條件下,依賴(lài)于DNA聚合酶體外擴(kuò)增目的DNA的反應(yīng)。
模板:是指包含待擴(kuò)增片段(目的片段)的一段DNA,可以是細(xì)菌和病毒的基因組DNA,細(xì)菌質(zhì)粒DNA,也可以是病毒RNA經(jīng)體外逆轉(zhuǎn)錄后形成的cDNA。
引物:是指與目的片段兩翼互補(bǔ)的一對(duì)單鏈DNA片段,一般由17-30個(gè)寡核苷酸組成。
DNA聚合酶:耐熱。商品化名稱(chēng)為T(mén)aq 酶
PCR反應(yīng)的3個(gè)步驟
變 性(denaturation): 通過(guò)加熱使DNA雙鏈解開(kāi),成為單鏈DNA的過(guò)程
退 火(annealing):反應(yīng)混合液冷卻至某一合適的溫度,兩個(gè)引物分別與兩條單鏈模板的互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合的過(guò)程
延 伸(elongation):反應(yīng)溫度再次升高,在DNA 聚合酶的作用下、 Mg2+存在的條件下,4種dNTP從引物的3’端開(kāi)始參入,引物沿5’-3’方向延伸,合成出新生的DNA互補(bǔ)鏈。
摘自本公司論壇——芯片上的實(shí)驗(yàn)室:http://www.pmmachip.com
標(biāo)簽:  PCR技術(shù) 基本原理 實(shí)驗(yàn)室方案 PCR反應(yīng)